Colonia del Sacramento è una città dell'Uruguay sud-occidentale, attraversato dal Río de la Plata e separata da questo da Buenos Aires, Argentina. 

È la più vecchia città dello Stato nonché capitale del departamento di Colonia. Ha una popolazione di 21.714 abitanti (censiti nel 2004).

Scoperta nel 1680 dai portoghesi, Colonia del Sacramento venne in seguito reclamata dagli spagnoli che avevano fondato colonie sulla riva opposta del fiume a Buenos Aires. 

La colonia continuò a passare di mano tra le due corone a causa di trattati come il famoso Trattato di Madrid del 1750 ed il Trattato di Sant'Ildefonso del 1777, per poi restare sotto il controllo spagnolo. Ripassò di nuovo al Portogallo e, in seguito, al Brasile a partire dal 1816, quando l'intera Banda Oriental (Uruguay) venne assegnata al governo di Rio de Janeiro.

I Guaraní lottarono nel 1742 nel tentativo di cacciare i portoghesi. Questa città era nota con il nome di Colônia do Sacramento sotto il governo lusitano.

Al giorno d'oggi la città si è espansa ad est, ma la parte originale mantiene lo stile urbano irregolare tipico del tempo, costruito dai portoghesi, che contrasta con lo stile ortogonale importato nei nuovi quartieri dagli spagnoli.

Il Barrio Histórico (quartiere storico) di Colonia del Sacramento è stato definito patrimonio dell'umanità dell'UNESCO. È una popolare attrazione turistica per i visitatori che arrivano da Buenos Aires, ed è servita da traghetti che solcano il Río de la Plata tra le due città, con aliscafi che permettono il trasferimento in 50 minuti. 

La parte storica di Colonia, che ha strade in ciottolato costruite dai portoghesi nel XVII secolo, è raggiungibile a piedi dal molo. Le maggiori mete sono:

Portón de Campo - Porta cittadina e ponte levatoio in legno

Faro e rovine del secentesco convento di San Francisco

Basilica del Sanctísimo Sacramento - Costruita in pietra dai portoghesi bel 1808

Museo portoghese - Costruito nel XVIII secolo, espone arredi portoghesi, gioielleria, uniformi e vecchie mappe portoghesi di spedizioni navali  

Casa de Nacarello - Casa portoghese del XVIII secolo

Museo municipale - Ricostruito dagli spagnoli nel 1835 col nome di Casa del Almirante Brown, espone artefatti e documenti di differenti epoche cittadine e culture

Casa del Viceré - La Casa del Virrey, ricostruita sopra alle rovine dell'originale

Iglesia Matriz - La più antica chiesa uruguayana, databile al 1695-99